Садржај
- Шта је генотип и фенотип?
- Објашњење генотипизације ХИВ-а
- Објашњење фенотипизације ХИВ-а
- Када се изводи тест генетске резистенције?
Када дође до неуспеха лечења, морају се одабрати алтернативне комбинације лекова како би се сузбила нова популација резистентног вируса. Испитивање генетске резистенције помаже у олакшавању овога идентификовањем врста резистентних мутација у „вирусном базену“ особе, истовремено утврђујући колико су ти вируси подложни могућим антиретровирусним агенсима.
За испитивање генетске резистенције на ХИВ користе се два основна алата: ХИВ генотипски тест и Фенотипски тест на ХИВ.
Шта је генотип и фенотип?
По дефиницији, генотип је једноставно генетски састав организма, док су фенотип уочљиве карактеристике или особине тог организма.
Генотипски тестови (или генотипизација) функционишу идентификовањем наслеђених упутстава у оквиру генетског кодирања ћелије или ДНК. Фенотипски тестови (или фенотипизација) потврђују изражавање тих упутстава под утицајем различитих услова околине.
Иако веза између генотипа и фенотипа није апсолутна, генотипизација често може предвидјети фенотип, посебно када се промене у генетском коду дају очекиваним променама у особинама или карактеристикама - као у случају развоја резистенције на лекове.
Фенотипизација, с друге стране, потврђује „овде и сада“. Циљ му је да процени реакцију организма на специфичне промене у притиску околине, на пример када је ХИВ изложен различитим лековима и / или концентрацијама лекова.
Објашњење генотипизације ХИВ-а
ХИВ генотипизација је генерално најчешћа технологија која се користи за тестирање отпорности. Циљ теста је откривање специфичних генетских мутација у гаг-пол регион вируса ' геном (или генетски код). Ово је регион у којем су ензими реверзне транскриптазе, протеазе и интегразе - циљеви већине антиретровирусних лекова - кодирани на ДНК ланцу.
Прво појачавањем генома ХИВ-а помоћу технологије ланчане реакције полимеразе (ПЦР), лабораторијски техничари могу да секвенцирају (или „мапирају“) генетику вируса користећи различите технологије за откривање мутација.
Тезајске мутације (или накупљање мутација) тумаче техничари који анализирају везу између идентификованих мутација и очекиване осетљивости вируса на различите антиретровирусне лекове. Интернет базе података могу да помогну упоређивањем секвенце теста са серијом прототипа вируса „дивљег типа“ (тј. ХИВ који не садржи резистентне мутације).
Тумачење ових тестова користи се за одређивање осетљивости на лекове, са већим бројем кључних мутација које дају виши ниво резистенције на лекове.
Објашњење фенотипизације ХИВ-а
Фенотипизација ХИВ-а процењује раст ХИВ-а особе у присуству лека, а затим упоређује раст са контролним вирусом дивљег типа у истом леку.
Као и код генотипских тестова, фенотипски тестови појачавају гаг-пол регион генома ХИВ-а. Овај одељак генетског кода се затим „калеми“ на клон дивљег типа помоћу технологија рекомбинантне ДНК. Добијени рекомбинантни вирус користи се за заразу ћелија сисара ин витро (у лабораторији).
Тада је вирусни узорак изложен растућим концентрацијама различитих антиретровирусних лекова све док се не постигне 50% и 90% супресија вируса. Затим се концентрације упоређују са резултатима контролног узорка дивљег типа.
Релативне промене „набора“ пружају опсег вредности за који се одређује осетљивост на лекове. Четворострука промена једноставно значи да је била потребна четири пута већа количина лека да би се постигла вирусна супресија у односу на ону дивљег типа. Што је већа вредност набора, вирус је мање подложан одређеном леку.
Ове вредности се затим стављају у доњи клинички и горњи клинички опсег, са горњим вредностима које дају виши ниво резистенције на лекове.
Када се изводи тест генетске резистенције?
У САД-у се тестирање генетске резистенције традиционално врши на пацијентима који не лече да би се утврдило да ли имају „стечену“ резистенцију на лекове. Студије у САД сугеришу да ће између 6% и 16% пренетог вируса бити резистентно на најмање један антиретровирусни лек, док ће скоро 5% бити резистентно на више врста лекова.
Испитивање генетске резистенције се такође користи када се сумња на отпорност на лекове код особа на терапији. Тестирање се врши док пацијент узима неуспешни режим или у року од четири недеље од прекида лечења ако је вирусно оптерећење веће од 500 копија / мл. Генотипско испитивање је углавном пожељно у овим случајевима, јер коштају мање, имају брже време обраде и нуде већу осетљивост за откривање смеша дивљег типа и резистентног вируса.
Комбинација фенотипског и генотипског испитивања је углавном пожељна за особе са сложеном резистенцијом на више лекова, посебно за оне изложене инхибиторима протеазе.